双抗体夹心法原理
以FABP为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=F14A(标记了胶体金)
Y2=F104B(固定在NC膜上即T线)
Y3=羊抗鼠IgG(固定在NC膜上即C线)
此方法较常用,主要用于较大分子量的蛋白(抗原)的检测。要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。也有个别的检测项目是双抗原夹心检测抗体的,原理类似。
竞争法原理
以吗啡为例(检测抗原)
阳性反应
Y1=胶体金标记的吗啡单抗
Y2=吗啡-BSA偶联物
Y3=羊抗鼠
此方法主要用于小分子抗原(毒品、农药、肽链等)的检测。由于抗原分子量小不能直接固定于NC膜上,常常用化学方法把小分子偶联到BSA等大分子物质上再固定于NC膜上。此结果与双抗原夹心法相反,阴性CT两条都是红线,阳性只有C线一条红线。
间接法原理
以HIV为例(检测抗体)
此方法主要用于血清中抗体检测,纯化或者重组的抗原固定于NC膜上,标记多为蛋白A(ProteinA或叫SPA,抗体Fc端结合而与其它蛋白质不结合)。此方法要求胶体金过量,一般来说样品再加入前需要稀释或者加极少量后再加缓冲液。
斑点免疫渗滤法使用就是间接法。
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