安全验证
用HPLC法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠含量方法的优化哈药集团制药总厂质检中心150000【摘要】注射用氨苄西林钠舒巴坦钠是用于治疗敏感菌引起的呼吸道感染、泌尿系统感染、肝胆系统感染、皮肤软组织感染的主要临床药物。因其自身药性对于人体有多方面的交叉过敏等影响，在实际使用过程中需要相应先进的含量测定方法，才能够确保在实用环境中具备更加广泛的市场，并赋予更加重要的临床医疗条件。本文依据注射用氨苄西林钠舒巴坦钠特性试验，确定相应含量测定方法的有效性，通过完善的色谱条件，期望为后续测定方法论证体系提供良好的参照。【关键词】注射用氨苄西林钠舒巴坦钠；HPLC法；PH值；含量测定本文中采用HPLC法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠含量，在实际药物含量分析方面具备有效统筹的条件同时，更能够依据多种溶液浓度相对客观的确定含量，在实际操作方面也相对简单和精准，在现有药品测量行业中，具备可持续化的延伸优势。一、实验试剂与试验仪器条件1.实验试剂注射用氨苄西林和钠舒巴坦钠（市场常见商品）、氨苄西林对照品和舒巴坦对照品均由中国药品生物检验检定所提供、乙腈作为色谱纯、磷酸二氢钠为固体试剂。2.实验仪器及色谱条件高效液相色谱仪AgilentTechnologies1200Series、色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱DIKMAplatisilODS5um150×4.6mm，以0.02mol/L磷酸二氢钠溶液（用1mol/L磷酸调PH=3.5）-乙腈（92：8）为流动相，检测波长为230nm,流速V=1.0ml/min,进样量10ul,要求氨苄西林峰的保留时间在6分钟以上。二、试验方法与结果1.线性范围测定精密称取舒巴坦对照品30.12mg氨苄西林对照品60.34mg置于同一50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释置刻度，分别精密量取此溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml，分别置于10ml的精密量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，照上述色谱条件量取20ul注入高效液相色谱仪，测定，舒巴坦峰面积(A与浓度（C）在0.15-0.60mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程A=8.13×102+7.93×104C.r=0.9993,氨苄西林在0.24-1.20mg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程A=5.03×102+2.03×104C.r=0.99922.样品的含量测定分别称取舒巴坦对照品30mg氨苄西林对照品60mg置于同一100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取10ul注入高效液相色谱仪；另取注射用氨苄西林钠和舒巴坦钠50mg置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10ul注入高效液相色谱仪；对比，得出表1结论。表1氨苄西林钠和舒巴坦钠溶液测定结果（%）3.重现性实验
同一样品连续重复进样5次，分别测定氨苄西林峰面积的RSD为0.36%，舒巴坦峰面积的RSD为0.51%，由此可见此方法重复性能良好。三、含量测定结论与优化方法1.色谱峰变形因素舒巴坦在微酸性至近中性介质中几乎完全解离，带负电荷,亲水性强，与固定相的分子间作用力较弱,氨苄西林的降解物、付产物和中间体等几乎均在氨苄西林之前洗脱。故舒巴坦与氨苄西林的杂质有可能同时洗脱,定量准确性较差。如采用离子对色谱法即在流动相中添加带正电荷的烷基铵离子如TBA,TBA吸附在固定相表面,在固定相表面建立具有一定量表面电位势的双电层,舒巴坦通过与双电层之间的静电吸引力而保留增强,在氨苄西林之后洗脱,使氨苄西林杂质不干扰舒巴坦的测定，则可同时测定此二组分。实践中发现,分析某些厂家的样品,会出现舒巴坦峰前伸并在峰前半部出现肩峰的异常现象,而分析对照品溶液时,舒巴坦峰形正常。这类“异常”样品的一个共同特点是:样品水溶液(15mg/ml的PH值均大于5.0,且PH值越高,峰变形越严重。通常认为:在一个具有较高缓冲容量的缓冲液中加入20%乙腈后，溶液的pH值一般仅增加0.1~0.2。因此,舒巴坦峰形异常可解释为:由于流动相的缓冲容量极低,当pH"值大于4.0的样品溶液注入色谱柱时,在色谱初始阶段形成一个pH值由高到低梯度减少的区带,舒巴坦在此区带中保留减弱。在最终得到的色谱图上