常见野生药用植物的抗氧化性


常见野生药用植物的抗氧化性
活性测定

学院:化学与制药工程学院



葎草的抗氧化性活性测定

一、实验目的
1.熟悉专业文献的检索方法。2.熟练设计天然药物的提取方法。3.掌握体外抗氧化活性实验筛选方法。4.了解药理活性与化学成分之间的关系。二、实验原理
近年的研究结果表明,在生物体内,需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟自由基,可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,损伤膜结构及功能并引起各类疾病;超氧自由基能损伤生命大分子而导致各种疾病。关于天然产物抗氧化活性的研究十分引人注目,从天然材料提取、精制而得到的产品———天然产物对人体的多种疾病往往具有很好的治疗、预防等药理作用和保健功能。据报道,然界中的植物中存在具有多种生物活性的天然产物,其中一些天然产物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表现,这对于抗癌、防癌、抗衰老、预防心血管疾病,提高人民身体健康会产生积极的作用。因此,研究自由基的检测方法并探讨物质对自由基的清除作用具有重要意义。DPPH·(二苯代苦味酰自由基分析法被广泛用于清除自由基物质性质的研究,DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其孤对电子在517nm附近有强吸收(显深紫色当有机清除剂存在时,孤对电子被配对,吸收消失或减弱,通过测定吸收减弱的程度,可评价自由基清除剂的活性。DPPH·法是用以评价天然抗氧化剂抗氧化活性的一种快速(反应时间仅需20min、简便、灵敏可行的方法。三、实验仪器与试剂
电子天平,量筒,普通漏斗,抽滤装置,紫外分光光度计,研钵,试管剪刀四、实验步骤1.药材的采集





采集样品,样品采集后,洗净晾干。用剪刀剪碎,再用研钵将药材磨细,然后用筛子将大块的筛除。2.药材的提取
准确称取干燥的葎草粉末样品0.4g,加入2050%乙醇溶液混匀,提取2h后过滤取滤液,滤渣再用20ml50%的乙醇水溶液浸提,滤液合并,合并提取液,定容于50ml容量瓶中,密闭冷藏保存,备用。3.体外抗氧化活性检测
0.004%DPPH的乙醇溶液中加入样品,混合均匀,30min后用分光光度计在517nm处测定吸光值。利用DPPH·溶液的特征紫红色团的吸收,用紫外-可见分光光度法测定加抗氧剂提取液后在波长517nm处吸收的下降表示其对有机自由基消除能力,按下表加反应液。

A0AiAj
用力摇匀,Ai所表示的样品在室温下静置30min后,加入比色皿中进行吸光度的测定,测出A0AiAj所表示样品的吸光度值,清除率按公式(1计算。.实验结果1.原始数据记录A0AiAj

0.6440.4310.065

2mlDPPH溶液+2ml50%乙醇溶液2mlDPPH溶液+0.2ml样品溶液
0.2ml样品溶液+1.8ml50%乙醇溶液+2ml无水乙醇

2.消除率的计算
由公式S=1-(Ai-Aj\A0*100%
消除率S=1-0.431-0.065*100%=43.17%
Vc标准曲线
1009080706050403020100
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
90.2173
83.8509
63.9751
45.8074
22.5155
0.6211系列1


浓度
1.2
Ai0.064
Aj0.001
Ao0.644
清除率90.2173

10.80.60.40.2

与葎草对比浓度0.8
0.1050.2230.350.50.6410.0010.0010.0010.0010.0010.6440.6440.6440.6440.64483.850963.975145.807422.51550.6211
Ai0.431
Aj0,065
Ao清除率43.17
0.644
在相同浓度下葎草的清除率相当于Vc清除率的0.67
六.实验结果讨论
葎草的药用价值
【功能主治】:清热解毒,利尿消肿。用于肺结核潮热,肠胃炎,痢疾,感冒发热,小便不利,肾盂肾炎,急性肾炎,膀胱炎,泌尿系结石;外用治痈疖肿毒,湿疹,毒蛇咬伤。【用途】
1)用于肺热咳嗽,可配伍鱼腥草、鸭跖草、忍冬藤等药同用。
2)对于湿热下注膀胱引起的小便不利,或尿道刺痛,或尿中有血等症,可配合凤尾草、扁蓄、冬葵子、海金沙、乌蔹莓、白茅根等同用。
3)用于肺痨咳嗽,午后潮热等症,可配合百部、黄芩、丹参、地骨皮等药同用。
4此外,还有用本品治皮肤湿疹或皮肤瘙痒等症,配合苍耳草等药煎汤外洗;治疗蛇虫咬伤、疮疡肿痛,用鲜草适量,洗净,捣烂外敷。葎草果穗
【其它】:花穗外用则可治肿疖、湿疹、肤炎;另有记载其种子可作开胃药。葎草根:治石淋,疝气,瘰疬。内服:煎汤,2540克;或捣汁。《中药大辞典》葎草果穗:治肺结核潮热,盗汗。内服:煎汤,2550克,(鲜者50150克)《中药大辞典》相关选方

①治膏淋:葎草捣生汁三升,酢二合。相和,空腹顿服,当溺如白汁。(《本草图经》
②治砂石淋:鲜葎草茎四至五两。捣烂,酌加开水擂汁服。(江西《草药手册》③治新久疟疾:葛葎草一握(去两头,秋冬用于者、恒山末等分。以淡浆水二大盏,浸药,星月下露一宿,五更煎一盏,分二服,以吐痰愈。(《纲目》④治久痢成疳:葎草干蔓捣筛,量多少,管吹谷道中。(《本草图经》⑤治痢疾或小便淋沥,尿血等:鲜葎草二至四两。水煎,饭前服,日两次。(《福建民间草药》
⑥治瘫,遍体皆疮者:葎草一担。以水二石,煮取一石,以渍疮。(《独行方》⑦治乌癞:葛葎草二秤(锉,细淘,益母草一秤(锉,洗淘。用水二石五斗,煮取一石五斗,漉去滓,盆瓮中浸浴一时辰久方出,用被衣覆之,又再浸浴一时辰久方出,勿令见风,明日复作。如入汤后,举身瘙痒不可忍,令旁人捉手,不令搔动,食顷渐定。后隔三日一浴。其药水经浴两次即弃之。(《圣济总录》葛葎草浴方
⑧治皮肤瘙痒:葎草适量,水煎熏洗。(《江西草药》
⑨治痈毒初起(皮色不变,硬肿不痛:葎草鲜叶一握。以冷开水洗净,和红糖捣烂,加热敷贴,日换两次。(《福建民间草药》
⑩治瘰疬:葎草鲜叶二两,黄酒二两,红糖四两。水煎,分三次饭后服。(《福建民间草药》植物药理
1.抗菌作用:茎、叶的乙醇浸液在液试管内革兰阳性菌有明显抑制作用。蛇麻酮和薇草酮在体外对革兰阳性菌如金黄色葡萄球菌、粪链球菌、肺炎链球菌、喉杆菌、炭疽杆菌、枯草杆菌和蜡样芽胞杆菌均有明显抑制作用。葎草
脾等脏器病灶内的抗酸杆菌数显著减少。蛇麻酮和萑草酮对革兰阴性菌、酵母菌和真菌抑制作用均很微弱或无效。
2.其它作用:辜草酮对猫有二硝基酚样作用,静脉注射3mg/kg后,可使氧耗量立即增加1倍,并出现呼吸急促,随之体温升高,呵因体温过度升高(45而致死。大量注射还可产生糖尿、血尿。对兔的作用远猫弱。

3.毒性实验:小鼠肌内注射蛇麻酮LD50600mg/kg后,l2h内死亡。每日肌内注射60mg/kg共四周,未见明显有害作用,病理组织学检查示肝脏小范围白细胞浸润和肾小管变性病灶,以5%阿拉伯胶悬液浼胃1500mg/kglh内小鼠死亡一半。[2]七、思考题
1、抗氧化活性检测还有哪些方法?
大多数方法涉及到直接或间接测量:1底物或标记底物或氧消耗的衰,(2氧化产物的生成。(3特征自由基的形成或衰减的速度或程度。在(1(2,抗氧化活性是以对反应物的消耗或生成物的形成的程度或速率来表征抗氧化活性的;(3是假设通过捕获脂质自动氧化中的自由基抑制氧化的,因此集中在检测被测抗氧化剂对自由基的捕获或抑制自由基的形成的能力上,而不是检测实际发生的氧化反应,ABTS法和DPPH法,超声波提取技术,有机溶剂提取法,酶解法,水提法,加速溶剂提取技术,超临界流体提取技术,微波提取技术
2、抗氧化作用与哪些药理作用有关?
抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质,其作用机理可以是直接作用在自由基,或是间接消耗掉容易生成自由基的物质,防止发生进一步反应。人体在不可避免地产生自由基的同时,也在自然产生着抵抗自由基的抗氧化物质,以抵消自由基对人体细胞的氧化攻击。抗氧化类药物可减少氧自由基对血管壁的损害,从而起到抗动脉样硬化的作用。天然抗氧化剂能有效地清除自由基与抗动脉硬化作用,以及影响花生四烯酸代谢的药理作用3、药物抗氧化活性强弱与化学成分存在什么样的联系
药物的抗氧化活性与植物中的多酚类、黄酮类,维生素C,维生素E,硒等具有明显的自由基清除活性和抗氧化作用的化学成分有着密切的联系,因此,些成分的含量多少直接影响抗氧化活性的强弱
例如:维生素C缺乏可大大降低耐力运动能力。补充维生素C可明显降低运动诱导的氧化应激。
维生素E是细胞膜内重要的抗氧化物和膜稳定剂。维生素E在维持肌肉组织的正常机构和代谢,特别是在肌肉收缩期间的能量供给和钙离子摄取和释放有着重要的作用。

生物类黄酮能够有效清除体内的自由基及毒素,预防、减少疾病的发生;消炎、抗过敏、广谱抗菌、抗病毒作用。解除醇中毒、保肝护肝。清热解毒、祛风湿、强筋骨、抗妇女更年期综合症等功效八.参考文献
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