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龙源期刊网http://www.qikan.com.cn三氯化锑分光光度法测定动物肝脏中维生素A含量作者:祝海珍来源:《现代食品·上》2017年第10要:目的:建立动物肝脏中维生素A含量的测定方法。方法:维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用产生蓝色物质,其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比,本研究于波长650nm处测定在选定条件下测蓝色物质的吸光度,从而间接测定维生素A的含量。结果:维生素A5100μg/mL范围内与吸光度呈线性关系,相关系数R2=0.9991,检出限0.1μg/mL,相对标准偏差为2.14%7.04%n=6),并选择鸡肝、鸭肝和猪肝做样品加标回收率试验,回收率都在90%以上。同时,将该方法与高效液相色谱法做比较,两者测定动物肝脏中维生素A含量的方法指标基本一致,均符合食品检测标准的要求。结论:本方法操作简便,分析速度快,结果可靠,重现性好,可用于动物肝脏中维生素A含量的测定。关键词:分光光度法;动物肝脏;维生素AAbstractObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofvitaminAinanimalliver.MethodsVitaminAinteractswiththreeantimonychlorideinchloroformtoproducebluematerialitscolordepthisproportionaltotheamountofvitaminAcontainedinthesolution.Theabsorptionofbluesubstancewasmeasuredin650nmandindirectlydeterminethecontentofvitaminA.ResultsTherewasafinelinearrelationshipbetweenthevitaminAintherangeof5100μg/mLandabsorbancethecorrelationcoefficientR=0.9991thedetectionlimitwas0.1μg/mLtherelativestandarddeviationrangedfrom2.14%to7.04%n=6.Whileexperimentofsamplerecoveryweredonewithchickenliverduckliverandlivertherecoveryratewasmorethan90%.AtthesametimethismethodwascomparedwithHPLC.ThedeterminationmethodsofvitaminAcontentinanimalliverwerebasicallythesame.Theywereinlinewiththerequirementsoffoodtestingstandards.ConclusionThemethodissimplequickreliableandreproduciblewhichcanbeusedforthedeterminationofvitaminAinanimalliver.KeywordsSpectrophotometryAnimalliverVitaminA中图分类号:O657.31维生素AVitaminAVA),亦名视黄醇,是人体生长发育及维持机体生命活动不可缺少的脂溶性维生素。维生素A不但可以维持正常的视觉功能,防止出现夜盲症,而且还具有维持上皮细胞结构的完整与健康、促进机体正常生长发育、增强机体的造血功能和预防癌症等十分重要的功能[1-2]。近年来发现维生素A对脑发育和学习记忆有不同程度的影响[3-5]
龙源期刊网http://www.qikan.com.cn动物肝脏被誉为食品中的维生素A之王。近年来,动物肝脏中维生素A的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC[6-9]和高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS[10]。高效液相色谱法和高效液相色谱-质谱法分离度高、重现性好、灵敏度高、准确性好,但其仪器比较昂贵,普通理化实验室不具备购置条件,并且仪器操作时间比较长,一般需要0.51.0h。本文旨在采用分光光度法建立一种快速检测动物肝脏中维生素A的方法,该方法仪器操作简单、分析成本低、速度快、结果可靠且重现性好。1仪器和试剂1.1试验仪器UV-4802H型紫外可见分光光度计,尤尼柯(上海)仪器有限公司;U3000高效液相色谱仪,赛默飞公司;AL204分析天平(感量0.001g),梅特勒-托利多公司;超声装置,昆山市超声仪器公司;RE-2000A旋转蒸发仪,上海亚荣有限公司。1.2试验试剂维生素A乙酸酯、甲醇,色谱纯,阿拉丁试剂公司;乙醚、无水乙醇、正己烷、无水硫酸钠,分析纯,国药集团化学试剂有限公司;三氯化锑、三氯甲烷,分析纯,阿拉丁试剂公司;试验用水为纯净水,娃哈哈集团。三氯化锑-三氯甲烷溶液:准确称取5g三氯化锑至100mL棕色容量瓶中,用三氯甲烷配定容,配制成50g/L三氯化锑溶液。维生素A标准溶液:准确称取维生素A乙酸酯50.0mg250mL皂化瓶中,加30mL水乙醇、20mL30%KOH甲醇溶液,于100℃回流皂化30min,冷却后用乙醚反复提取3次,并用甲醇定容至50mL容量瓶中,得浓度为1.0mg/mL的贮备液。2试验方法2.1样品的处理与分析2.1.1研磨精确称量5g试样,放入盛有15g无水硫酸钠的研钵中,研磨至试样中水分完全被吸收,并均质化。2.1.2提取
龙源期刊网http://www.qikan.com.cn小心地将全部均质化试样移入带盖的三角瓶中,准确加入50mL乙醚,压紧盖子,用力震5min,使试样中维生素A溶于乙醚中,使其自行澄清。2.1.3浓缩取澄清的乙醚提取液5mL,放入比色管中,在80℃水浴上抽气蒸干,立刻加入1mL氯甲烷溶解残渣。2.2校准曲线的绘制分别准确量取0.000.050.100.200.50mL1.00mL的维生素A标准液于7个比色管中,分别用三氯甲烷定容至5mL,各管加入乙酸1滴。将7个比色管移至分光光度计前,在650nm波长处,用空白溶液调节吸光度至零点,迅速加入5mL三氯化锑-三氯甲烷溶液,于30s内测定其吸光度。以吸光度为纵坐标,维生素A含量为横坐标绘制标准曲线图。2.3样品的测定采用2.1样品的处理方法,处理鸡肝、鸭肝和猪肝3种动物肝脏,然后按照2.2步骤测定样品,根据下列公式计算样品中维生素A的含量:其中,X为试样中维生素A的含量,单位为mg/100gc为由标准曲线上查得试样中维生素A的含量,单位为μg/mLm为试样质量,单位为gV为提取后加三氯甲烷定量之体积,单位为mL100为以每百克试样计。2.4加标回收率的测定采用2.1样品的处理方法,处理鸡肝、鸭肝和猪肝3种动物肝脏,同时往试样中加入一定量的维生素A,然后按照标准曲线步骤测定样品中维生素A的浓度,从而得到样品的加标回收率。3结果与讨论3.1波长的选择吸收光谱见图1。由图1可知,维生素A及试剂空白在600800nm范围内无吸收(见曲线12),而当维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用后生成蓝色物质,该蓝色产物在650nm处有很强的吸收效果(见曲线3)。
龙源期刊网http://www.qikan.com.cn3.2显色条件的优化3.2.1显色剂种类的选择由于维生素A是脂溶性维生素,分别选用甲醇-三氯化锑、乙醇-三氯化锑、丙酮-三氯化锑和三氯甲烷-三氯化锑进行试验。结果发现:维生素A只有在三氯甲烷-三氯化锑溶液中,才能相互作用后生成蓝色物质。故试验选用三氯甲烷-三氯化锑作为显色剂溶剂。3.2.2显色剂用量的选择试验发现,维生素A在三氯甲烷溶液中与三氯化锑相互作用,产生蓝色物质,其深浅颜色与维生素A的含量成正比。试验考察了三氯化锑用量对反应体系吸光度的影响。结果表明,当50g/L三氯化锑溶液加入量为5mL时,体系的吸光度最大且最稳定,故三氯化锑的用量为5mL3.2.3显色时间的选择试验考察了显色时间对体系吸光度的影响。试验表明,随着显色时间的延长,蓝色物质颜色逐渐变浅,体系吸光度逐渐减低。故本试验选择迅速加入三氯化锑-三氯甲烷溶液,于30s内测定其吸光度。3.3标准曲线及检出限以空白液调零,在650nm测定1mL含有5102050μg100μg维生素A标准液的吸光值。将吸光度(A)与浓度(c)进行线性回归,得到回归方程为A=0.0076c+0.1407,相关系数R2=0.9991,见图2。试验结果表明:5100μg/mL范围内,维生素C的吸光度与浓度呈现明显的线性关系,检出限为0.1μg/mL3.4方法的精密度样品测量的精密度(重现性)是由相对标准偏差来表示的。试验中选取了鸡肝、鸭肝和猪3种动物的肝脏,按照试验方法测定其维生素A的含量,结果见表1。从表1可知,鸡肝、鸭肝和猪肝中维生素A的含量在0.891.77mg/100g,相对标准偏差(RSD)在5.57%8.53%。说明此方法稳定,相对标准偏差较小,试验误差在可接受的范围内。从试验数据可知,动物肝脏是一种维生素A含量极其丰富的食物来源,尤其是猪肝和鸡肝,可以为人体提供丰富的维生素A3.5方法的准确度方法的准确度是通过样品的加标回收率测定来考察的。按照2.4试验方法,进行动物肝脏中维生素A的加标回收率测定,结果如表2所示。从表2可知,鸡肝、鸭肝和猪肝的维生素A
龙源期刊网http://www.qikan.com.cn的回收率分别为92.43%95.01%92.77%,均达90%以上,说明比色法测定动物肝脏中维生A的试验方法比较准确,结果重复性好,可用于大多数动物肝脏中维生素A的测定。3.6与高效液相色谱法的比较高效液相色谱法测定动物肝脏(鸡肝、鸭肝和猪肝)中维生素A的精密度试验结果和准确度试验结果分别见表3和表4分光光度法测定鸡肝、鸭肝和猪肝中维生素A的含量分别为1.770.891.18mg/100g相对标准偏差分别为5.57%8.53%6.45%,维生素A的回收率分别为95.01%92.43%92.77%;高效液相色谱法法测定猪肝、鸡肝和鸭肝中维生素A的含量分别为1.930.711.07mg/100g,相对标准偏差分别为0.85%3.06%1.87%,维生素A的回收率分别为92.49%93.18%94.04%。由上述结果可知,除了分光光度法的相对标准偏差较高之外,分光光度法与高效液相色谱法测定动物肝脏中维生素A含量的方法指标基本一致,均符合食品检测标准的要求。4结语众所周知,在检测实验中常用分光光度法,因其具有便捷操作且较为经济的优势。此外,试剂的配制方法也较为简单,因此使得该方法在实际工作中得到了广泛应用。本研究采用分光光度法,利用维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用产生蓝色物质,其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比,从而测定维生素A的含量。本试验分别从标准曲线及检出限、方法的精密度和方法的准确度进行研究,同时将分光光度法与高效液相色谱法进行比较,发现分光光度法测定动物肝脏中维生素A含量的方法学指标与高效液相色谱法基本一致,完全符合食品检测标准的要求,并且分光光度法相对于高效液相色谱法,具有操作方便、分析成本低、速度快、仪器更为普及等优点,在日常检测速度方面具有更大的优势。参考文献:[1]赵建民.烹饪营养与食品安全[M].北京:中国旅游出版社,2015.[2]王先远.维生素的生理功能(上)[J].开卷有益·求医问药,2004243):28-29.[3]芹,徐济达,王嵘,等.维生素ASD大鼠脑组织MC4RPOMC基因表达的影响[J].南京医科大学学报(自然科学版),20143410):1342-1345.[4]陈仪坤,洪君蓉,徐家玉,等.复合微量营养素缓解体力疲劳和改善学习记忆的影响[J].营养学报,2007523):213-216.
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