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安徽农学通报,Anhui AgriSciBul2015,21(19) l9 白芨多糖的抑菌作用研究 代建丽 周斯荻 刘铭轩 史玉恒 张国彬 吴业颖 武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉430223) 要:以水提醇沉法提取白芨多糖,应用滤纸片法研究白芨多糖对大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌和 枯草芽孢杆菌的生长抑制作用,并测定大肠杆菌茵液的电导率、碱性磷酸酶含量和蛋白质含量探讨白芨多糖 的抑茵机理。结果表明,白芨多糖对4种茵的生长均有抑制作用,20mg/mL的白芨多糖抑茵效果较好,白芨多 糖可导致大肠杆菌细胞壁和细胞膜的通透性增大,引起细胞内容物外泄而起到抑茵作用。 关键词:白芨多糖;抑茵活性;抑茵机理 中图分类号Q946.3 文献标识码A 文章编号1007—7731(2015)19一l9—03 Study on the Antbacterial Activiy of Bleta striata Polysaccharde Dai Jianl et a1 (Colege of Lie Science,Wuchang Universiy f Technology,Wahan 430223,China) Abstract:Water——soluble polysaccharides were separated from Bletilla striata by hot——water extraction and its anti— bacteral activity against Escherichia coli,Proteus vulgaris,Staphyloccocus aureus and Bacillus subtilis were studied wih fer method.The changes in elect conductviy,alkalne phosphatase(AKP)content and protein concenta— tion in the medium were measured to study the antibaeteria mechanism.Results showed that the polysaccharides 0f BletiUa striata had antibacter activity against the four bactera and had strong inhibition effect at the concentration of 20mg/mL.The permeability of cell membrane and cell wa of Escherichia coli were increased after treated with Bletilla striata polysaccharde,which resulted in the release of cell components. Key words:BletiUa striata polysaccharide;Antibacteral activity;Antibaeterial mechanism 中药白芨为兰科植物白芨(Bla sata(Thunb. Reichb_£)的干燥块茎,具有收敛止血、消肿生肌之功效, 1.材料 白芨购自武汉国药股份有限公司中药饮片 厂;金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、枯草芽抱杆 菌(Bacius subts)、大肠杆菌(Escherchia col)、变形杆 菌(Proteu vulgaris)购于武汉大学中国典型培养物保藏 中心,武昌理工学院生科院实验室活化保存。 1.方法 临床上广泛用于治疗咳血、吐血、溃疡疼痛、手足皲裂等 症。现代研究显示,白芨的主要药用成分为白芨胶,又称 白芨多糖 。白芨甘露聚糖胶浆对人上消化道出血有良 好的止血疗效 。白芨多糖能促进大鼠背部切割伤创面 的创伤愈合 ,并能促进大鼠应激性胃溃疡的愈合 。但 是,有关白芨抑菌作用的研究较少。目前有少量研究表 明白芨提取物具有抑菌效果,Michinori等发现白芨的乙 醇浸提液对黄色葡萄糖菌和枯草杆菌有抑制作用 ,陈 1.2. 白芨多糖的提取及含量测定 白芨饮片粉碎、过 筛,称取30g,按1:2O(W/V)比例加入蒸馏水,80%浸提 2h,重复提取3次,合并提取液,过滤,滤液于旋转蒸发仪 中减压浓缩至稠膏状,加3倍体积95%乙醇沉淀。过滤, 取沉淀,加lOmL蒸馏水溶解,Sevag法脱蛋白,透析,再次 玉等发现白芨水煎剂能抑制变形链球菌的生长_],白芨 中起抑菌作用的有效成分及其抑菌机理尚缺乏研究。 植物多糖作为一类重要的生物活性物质,已在许多种属 中被证明具有抑菌作用 …。本实验对白芨多糖的抑菌 加入3倍体积95%乙醇沉淀。过滤,取沉淀,50℃干燥得 白芨多糖。以葡萄糖制作标准曲线,苯酚硫酸法测定多 糖含量…] 作用和机理进行了初步研究,以拓展中药白芨的药用 范围。 1.2.2 白芨多糖的抑茵试验将大肠杆菌、金黄色葡萄 球菌、枯草芽孢杆菌和变形杆菌用LB活化,同时将白芨 多糖稀释成5mg/mL、lOmg/mL、20mg/mL、40mg/mlA种浓 1材料与方法 基金项目:湖北省教育厅科研项目(组培白芨及其有效成分抗肿瘤作用研究,B2014129)。 作者简介:代建丽(1978一),女,湖北随州人,硕士,讲师,从事植物细胞工程方面的研究工作。 收稿日期:2015—09-29 

21卷19期 代建丽等 白芨多糖的抑菌作用研究 2  在培养2h时达到最大值,以后呈下降趋势,但均高于对 照,说明白芨多糖能够破坏细菌细胞壁的完整性,在短时 间内造成细菌细胞壁通透性增加(图3)。 2.白芨多糖对大肠杆菌培养液中蛋白质浓度的影 在大肠杆菌培养液中添加白芨多糖后,菌液的蛋白 质含量在4h内一直呈上升趋势,且显著高于对照,说明 白芨多糖引起了大肠杆菌胞内蛋白质的外渗。胞内蛋 白的外渗进一步说明大肠杆菌细胞壁和细胞膜的通透 性变大,细胞内的一些大分子物质可以渗出细胞。由于 提取的白芨多糖没有进一步纯化,其中含有少量的蛋白 质杂质,约为2.93I ̄g/mL,样品组0h的A  值要高于对照 (图4)。 图4白芨多糖对大肠杆菌菌液蛋白质含量的影响 讨论 报道表明,很多植物的多糖具有抑菌作用,其作用浓 度为1%一25mg/mL” ,其中葛根多糖和大豆多糖对大肠 杆菌的最小抑菌浓度均为8mg/mL。本实验据此设计了 5mg/mL、lOmg/mL、20mg/mL、40mg/mL4种多糖浓度,考察 自芨多糖对常见的革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草 芽孢杆菌及革兰氏阴性菌大肠杆菌、变形杆菌的作用效 果,结果表明,5mgmL的白芨多糖无抑菌效果,较高浓度 即20mg/mL多糖对4种菌具有较强的抑制作用。白芨多 糖的有效抑菌浓度偏高,并显著高于茶多酚 、蒲公英黄 酮 等其他类型的次生物质。 药物的抑菌机制包括干扰细菌细胞壁的合成、抑制 细菌核酸、蛋白质的合成及损伤细菌的细胞膜等。本实 验表明,白芨多糖能改变大肠杆菌细胞壁和细胞膜的通 透性,使其通透性增大,使细胞代谢发生紊乱而抑制其生 长。电导率、碱性磷酸酶、胞外蛋白含量的变化规律与已 有的研究基本一致 ,在时间节点上略有不同。电导 率的对照组2h时菌液的电导值下降,可能是由大肠杆菌 吸收利用培养液中的NaC1引起,实验组大肠杆菌在利用 NaC1时胞内离子有外渗,因此没有出现电导值的显著变 化。白芨多糖是否存在其他的抑菌机制有待进一步研 究,多糖的不同组分是否存在功能上的差异也需要进一 步实验观察。 参考文献 [1]任华忠,何毓敏,杨丽.白及化学成分其药理活性研究进展[J].亚 太传统医药,009,5(2):134—139. [2]悦随士,田河林,李丽鸣,等-白芨甘露聚糖胶浆治疗上消化道出 血的临床观察[J].中国现代医学杂志,2007,17(19):2375—2377. [3]Sunr S,Chen Xh,Cheng T M,et a1Some factors of BletaStria— ta in woundhealing[JJ.Chinese journal clinicalrehabitation, 2003,7(29):3927—3929. 4]武桂娟,苏晓悦,夏学丽,等.白芨多糖对大鼠应激性胃溃疡影响 的实验观察[J].中医药信息,2011,28(3):43—45. [5]Mihino K,Noko S,Miho Y,et a1Applaton sudies ohi zomaBletllae(rhizomes of Bletlastriata)on atopic dermatis[J]. Nature medicine,2003,57(2):55—60. [6]陈玉,张晓芳,朱剑东.中药白芨抑制变形链球菌的实验研究[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志,2007,7(8):452—454. 7]李瑜,周玉,江冠民,等.枸杞多糖与黄芪多糖抑菌活性的研究 [J].现代生物医学进展,2012,12(26):5061—5063. [8]杨长友.葛根多糖抑菌活性的测定[J]宁德师专学报(自然科学 版),2011,2(2):130—133. [9]田龙.水溶性大豆多糖的抑菌活性研究[J1.中国油脂,2008,33 (12):64—66. [1O]蔡娟,黄敏桃,黄云峰,等.苦丁茶多糖活性成分动态累积及其抑 菌活性[J].食品科学,2014,35(9):43—47. [11]韩丹,王艳萍,毕亚静,等_白芨多糖提取方法的优选及其理化性 质研究[J].药学实践杂志,2013,31(1):35—37. [12]侯伟峰,谢晶,蓝蔚青,等.植酸对大肠杆菌抑茵机理的研究[J]. 江苏农业学报,2012,28(2):443—447. [13]周先汉,张秀喜,朱稀檩,等.蜂胶提取物抑菌活性及其抑菌机理 的研究[J].食品科技,2009,34(5):233—236. [14]王晓英.蒲公英总黄酮对假单胞菌抑菌机理的探讨[J]_食品研 究与开发,2012,3(11):18—22. [15]钱丽红,陶妍,谢晶.茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌 的抑菌机理[J].微生物学通报,010,37(11):628—1633. (责编:张长青) 
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