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龙源期刊网http://www.qikan.com.cn饲料中维生素A的测定方法解析作者：谈暠媛鲁小翠来源：《湖北畜牧兽医》2014年第12期摘要：针对饲料中维生素A含量的检测方法-HPLC进行了详细的解析，对各个步骤应该注意的事项进行了归纳总结，为饲料中维生素A的含量检测提供参考意见。关键词：维生素A；皂化法；高效液相色谱中图分类号：S816.2文献标识码：B文章编号：1007-273X（2014）12-0062-01维生素是动物所需的五大营养素之一。其中维生素A的主要营养作用有：维生素A是视紫红质（感光色素）的重要组成成分，维持正常视觉功能；维生素A可保护上皮组织，防止上皮细胞萎缩、角化，保护呼吸道、消化道、生殖泌尿器官黏膜，利于公畜精子生成；增强动物免疫力，促进骨骼发育。维生素A的化学名是视黄醇，呈淡黄色油状物，易氧化，遇光易变质。在饲料中的维生素A是通过附着在一定载体上以视黄醇乙酸酯或视黄醇棕榈酸酯的形式添加进去的[1，2]。1方法解析目前检测饲料中维生素A的含量主要是分为皂化法[3]和直接提取法。直接提取法主要适用于维生素预混料，定量限较高。皂化法一般适用于维生素A含量较低的配合料、浓缩料及复合预混料。针对GB/T17817-2010《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》中第一法皂化提取法提出几点见解。皂化法分为以下几个步骤：皂化—提取—水洗至中性—浓缩—过膜—供高效液相色谱法检测。1.1皂化皂化是指在碱性环境下，油脂被水解生成羧酸盐和醇的反应。由于维生素A在酸性环境下不稳定，在碱性环境下稳定，易氧化，耐热性好。所以维生素A的皂化步骤是在碱性环境下，加入抗氧化剂抗坏血酸，在沸水浴上回流30min，将维生素A提取出来，将其他成分转化成可溶于水的成分。需注意的是：①L-抗坏血酸乙醇溶液易氧化，所以最好临用新配；②在回流过程中需不时振荡皂化瓶，防止试样粘附瓶壁，导致皂化不充分；③皂化结束时用5mL无水乙醇和5mL水自冷凝水顶端冲洗其内部，将附在冷凝管内壁上的蒸汽水滴冲洗下去。
龙源期刊网http://www.qikan.com.cn1.2提取提取是用无水乙醚将维生素A（不皂化物）从皂化后的溶液中提取出来。由于维生素A是脂溶性维生素，不溶于水，易溶于乙醚，所以可通过液液萃取的方式将维生素A提取出来，并去除水溶性物质。需注意的是：①第一次液液萃取时，需用50mL的水分2～3次冲洗皂化瓶，将瓶底的残渣溶解并入分液漏斗中；②一开始振摇时要缓慢，并不时开盖放气，待气量减小后，再剧烈充分地振摇。1.3水洗水洗是每次用100mL水洗涤提取后的乙醚，直至水层洗至中性。需注意的是：①第一次水洗时振摇力度要小，可防止乳化不易分层，逐次水洗时振摇力度可增强；②由于水和乙醚有一定程度的互溶性，每个样品水洗的次数要相同，否侧对样品的平行性有影响。1.4浓缩浓缩是将洗至中性的乙醚提取液通过无水硫酸钠脱水，转移至250mL棕色容量瓶中，加100mgBHT溶解，用乙醚定容至刻度。再从中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中，部分真空旋干或者氮气吹干。需注意的是：①脱水时可将乙醚提取液通过装有约5g无水硫酸钠的滤纸，无水硫酸钠一定要是粉末状，有结块时需烘干再使用，并且乙醚提取液通过的速度不要太快，否则均会影响脱水效果；②过滤完后，有一定量的乙醚提取液吸附在无水硫酸钠上，需用10mL的乙醚洗涤分液漏斗和无水硫酸钠2～3次，将洗液并入容量瓶中；③水浴的温度要控制在45℃左右，不能太高；④乙醚真空旋转蒸干至3～5mL，取下，立即用氮气吹干，或直接水浴蒸干。如果用真空旋转将乙醚完全蒸干，维生素A含量损失较大，且氮吹时氮气不能开太大，避免样品吹出瓶外。1.5溶解测定将吹干后的残渣用正己烷（正相色谱检测）或甲醇（反相色谱检测）溶解稀释，使维生素A最后浓度在5～10IU/mL，通过0.45μm过滤膜过滤，用于高效液相色谱仪分析。经过试验证明，可用无毒的无水乙醇代替甲醇溶解残渣。2小结在试验中还应注意以下几点：①检测样品要密封保存，避光（避免日光和暴晒）；②检测的饲料样品不能研磨，研磨会导致样品温度过高并破坏维生素A的包被，使其容易氧化，对维生素A的含量测定有影响；③试验时应避光，在通风柜里进行，尽量使用棕色玻璃器皿；④分液漏斗振摇后，静置的时间一定要长，大约10min